【檢驗原理】
蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;色素與單增李斯特氏菌具有的酶發生特異性反應,水解底物,釋放出顯色基團,在平板上,單增李斯特氏菌呈現綠~藍綠色的光滑規則的小菌落;抑制劑和配套試劑可抑制雜菌的生長。
【單增李斯特顯色培養基配方成分】
配方(每升) | 含量 |
蛋白胨 | 15.0g |
酵母膏粉 | 5.0g |
瓊脂 | 15.0g |
氯化鈉 | 5.0g |
色素 | 2.3g |
抑制劑 | 5.0g |
去離子水(平板) | 1000ml |
終pH 7.1±0.2(25℃)
【使用方法】
1.稱取單增李斯特顯色培養基干粉47.3g,加入蒸餾水或去離子水1 L,攪拌加熱煮沸至*溶解,分裝三角瓶,充分溶解,121℃高壓滅菌15min,冷至50℃左右。
2.取10支配套試劑分別加入1mL無菌水,使之*溶解。
3.將配套試劑加入到已冷至48℃左右基礎培養基中,充分混勻后傾注無菌平皿。
4.按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液,進行增菌培養后,用接種環取1環增菌液,劃線接種于顯色平板上,置于36±1℃培養24-48小時。
5.觀察結果。致病性李斯特24h后開始出現藍綠色,至36~48h藍綠色明顯。挑取顯色平板上呈藍綠色光滑規則,直徑約1~2mm的可疑單菌落進行進一步的試驗。
6.對疑似單增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管進行下一步的鑒定。
注:如產品類型為干粉,按上述1-6進行操作;若為即用型平板,按4-6進行操作即可。
【質量控制】
1.外觀方面
干粉基礎:流動性良好的淡黃色粉末。配套試劑:淡黃色凍干粉。
制備好平板:淡黃色不透明凝膠。
2.生物學方面
接種單增李斯特氏菌顯色培養基后于36±1℃培養24-48h
【儲存條件及保質期】
干粉培養基:2~8℃避光保存,用后立即旋緊瓶蓋。貯存期兩年。
配套試劑:2~8℃避光保存。貯存期兩年。
即用型平板:2~8℃避光保存,多一周。
【注意事項】
1、稱量時注意粉塵,避免引起呼吸道系統不適。
2、干粉培養基使用后立即旋緊瓶蓋,避免吸潮結塊。
3、自制平板時需注意培養基的厚度,厚度過薄容易造成瓊脂水分保持性下降,開裂;因此,一般需要15-20mL(Φ90mm)體積培養基,平板培養基厚度至少為2mm。
4、即用型成品平板應該盡量保持在2-8℃下保存且與存放容器冷凝管保持一定距離以避免凍損壞。產品多次在低溫與常溫之間變更會引起瓊脂的泌水,屬于正?,F象。使用前應平衡至室溫且盡量在無菌干燥箱中預干燥。
5、質檢報告可以登錄環凱網站,打開“客服中心”頁面,輸入產品批號下載。
【廢物處理】
檢測之后帶菌平板置于121℃下高壓滅菌30分鐘后處理。
【執行標準】
Q/HKSJ 03 普通微生物培養基
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